3种不同抗凝剂对外周血培养的NK细胞功能影响

摘要：

目的 探讨外周血经3种不同抗凝剂处理后培养的自然杀伤(NK)细胞的增殖率和杀伤功能的影响研究.方法 采集10例年龄(35±5)岁健康志愿者15 mL外周血,分别置于含乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2,EDTA组)、细胞保存液(细胞保存液组)和肝素钠(肝素钠组)的抗凝管中.用淋巴细胞分离液收集单个核细胞,在NK细胞培养液中培养单个核细胞12d,并观察细胞生长情况.在第4、6、8、10、12天时,收集细胞用CCK8法检测NK细胞的增殖情况.在细胞增殖最明显的第12天收集细胞,通过流式细胞仪检测各组NK细胞的颗粒酶、穿孔素和CD 107a.台盼蓝染色检测细胞活性.通过CCK8法检测各组对肿瘤细胞株K562杀伤活性.结果 通过细胞增殖发现,EDTA组NK细胞增殖不明显,肝素钠组和细胞保存液组增殖明显.第12天时检测发现,肝素钠组增殖倍数为128.15±6.38,细胞保存液组增殖倍数为107.51±5.70;肝素钠组优于细胞保存液组(t=6.20,P=0.00).肝素钠组NK细胞纯度表达为(84.49±2.35)％,也明显高于细胞保存液组NK细胞表达[(77.63±1.37) ％].经台盼蓝染色检测,肝素钠组和细胞保存液组细胞活性率均为100％.通过流式细胞仪检测发现,肝素钠组NK细胞颗粒酶B、穿孔素和CD107a的表达都明显高于细胞保存液组(t=12.76、17.76、5.67,P=0.00、0.00、0.00).对肿瘤细胞株K562杀伤结果显示,肝素钠组NK细胞杀伤活性(50.12％±3.42％)明显高于细胞保存液组(41.88％±2.47 ％)(t=4.78,P=0.001).结论 肝素钠和细胞保存液均可用于NK细胞培养的血液抗凝,但肝素钠组NK细胞的杀伤功能明显优于细胞保存液组.

关键词：抗凝剂、NK细胞、细胞增殖、杀伤功能、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)、细胞保存液、肝素钠

所属期刊栏目：22

分类号：R446.6(诊断学)

资助基金：南京军区医学科技创新重点项目14ZD17

在线出版日期：2018-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：572-577