CREG基因敲除小鼠胚胎干细胞的筛选及鉴定

摘要：

目的:为阐明E1A激活基因阻遏子(Cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)在发育过程中的作用,本研究拟通过高浓度药物筛选获得基因敲除的小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC).方法:用0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、1.5 mg/ml、2.0mg/ml、2.5 mg/ml及3.0 mg/ml 6个浓度的G418培养CREG杂合型(CREG其中一个等位基因被新霉素抗性neo基因替代)小鼠ESC 2周,确定最佳的G418筛选浓度.挑取该浓度下存活的ESC克隆进行扩增.将每个ESC克隆一半冻存,另一半贴壁培养.待ESC生长至80％融合后分别提取基因组DNA和蛋白.PCR方法扩增CREG基因明确基因组中是否存在CREG基因,Western Blot 方法鉴定是否有CREG蛋白表达.结果:确定2.0 mg/ml G418为最佳的筛选浓度.在该浓度下,共获得存活的克隆10个,PCR证实C2及C7克隆基因组中没有CREG基因,Western Blot证实C2及C7无CREG蛋白表达.结论:成功获得CREG基因敲除的小鼠ESC 2株,为深入研究CREG功能奠定了基础.

关键词：CREG、基因敲除、胚胎干细胞

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分类号：Q291

资助基金：国家自然科学基金重点项目81130072;国家科技部973前期项目2011CB512111;国家自然科学基金面上项目81070097;辽宁省科技攻关项目2010225036

在线出版日期：2013-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：6221-6224