内江猪IL-18基因的克隆及原核表达

摘要：

以ConA刺激的内江猪外周血单核淋巴细胞(PBMC)为模板,采用RT-PCR技术扩增出猪IL-18全长基因,克隆其成熟蛋白的编码基因(471bp)至pMD18-T克隆载体,经双酶切和测序获得阳性克隆.通过EcoR I/Xho I双酶切及连接反应,构建了pET-32a(+)-IL-18原核表达质粒.经双酶切和DNA测序证实重组质粒构建正确,将阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE,Western-blot证实表达出35kD左右的融合蛋白.经实验确定重组内江猪IL-18蛋白诱导表达的最佳条件为IPTG 0.2mmol/L,30℃诱导培养5h.在最佳表达条件下,pIL-18的相对含量为59.6%.内江猪IL-18的原核表达为重组IL-18的纯化及其生物学功能的进一步研究提供了基础.

关键词：内江猪、白细胞介素18、原核表达

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分类号：S828(家畜)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2004CCA011800;教育部长江学者和创新团队发展计划IRT0555

在线出版日期：2007-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：989-992