獐ISSR-PCR反应体系的建立与优化及引物筛选

摘要：

利用正交试验L16(45)对影响獐(Hydropotes inermis)ISSR-PCR反应的Taq DNA聚合酶浓度、dNTP浓度、引物浓度、Mg2+浓度及模板DNA浓度5个因素在4个水平上进行优化,同时对退火温度进行梯度PCR反应,以建立适合于獐ISSR-PCR反应的最佳体系.最终确定獐25μL ISSR-PCR反应体系为:Taq酶1.25 U·25μL-1、Mg2+浓度2.5 mmol·L-1、引物浓度0.3 μmol·L-1、DNA模板量350 ng·25μL-1、dNTP浓度0.15 mmol·L-1.在此基础上,利用优化的反应体系成功筛选出10条用于獐相关研究的ISSR引物并确定了各自的最佳退火温度,为今后利用ISSR技术进行獐的物种鉴定与分类、亲缘关系、系统发育和生理病理学研究奠定了技术基础,也为开展其它大型资源动物如黑麂的保护遗传学研究提供理论基础.

关键词：獐、正交试验、ISSR、引物筛选

所属期刊栏目：28

分类号：Q953;Q959.842(动物学)

资助基金：浙江省重点学科生态学基金和浙江省新苗人才计划基金2007R40G2030152

在线出版日期：2009-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：335-341