人白细胞介素-10在大肠杆菌中的高效可溶性表达及一步纯化

摘要：

目的:在大肠杆菌(E.coli)中表达和纯化人白细胞介素-10(IL-10).方法:用PCR技术从质粒pH15C中扩增编码人IL-10成熟蛋白的cDNA序列,将其克隆到pET-44载体中,构建表达质粒pET-44-IL-10.用菌落PCR和限制性酶切鉴定重组质粒并进行序列分析.重组质粒转化E.coli RosettaBlue(DE3)表达含6×His的重组人IL-10蛋白.重组蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化.结果:RosettaBlue(DE3)经1 mmol/L IPTG诱导、25℃培养,表达的IL-10主要以可溶性形式存在,表达效率为26%.超声破菌后的可溶性上清经一步Ni-NTA亲和层析进行纯化,所得蛋白纯度大于95%.结论:成功地得到了重组人IL-10纯品.

关键词：白细胞介素-10、大肠杆菌、可溶性蛋白、纯化

所属期刊栏目：19

分类号：R3(基础医学)

资助基金：广东省卫生厅科研项目A2003484

在线出版日期：2006-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：132-135