无血清悬浮培养昆虫细胞表达人纤溶酶原Kringle5的研究

摘要：

目的:使用杆状病毒载体表达系统在无血清悬浮培养的条件下进行Kringle5的表达.方法:对草地夜蛾卵巢细胞(Sf9)进行无血清培养驯化.构建Kringle5重组杆状病毒,通过三级扩增的方法制备重组病毒贮存液.Western方法确定Kringle5在Sf9细胞中的表达形式和表达条件.在培养体积为500 mL的无血清悬浮培养条件下对Kringle5进行表达.应用Ni2+亲合层析纯化了表达的重组蛋白,去除了氨基端融合的His-tag.应用原代培养人脐静脉内皮细胞测定了重组Kringle5的活性.结果:重组Kringle5蛋白的产量为1.7 mg/L,半数有效剂量(ED50)为109.2 nmol/L,去除氨基端His-tag序列后获得的Kringle5 ED50为59.59 nmol/L.结论:Kringle5可以在无血清悬浮培养Sf9细胞中进行高效表达,研究结果为进行Kringle5的大规模高效表达奠定了基础.

关键词：无血清培养、昆虫细胞、杆状病毒载体表达系统、Kringle5

所属期刊栏目：19

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2006-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5