翘嘴鳜病原嗜水气单胞菌分子特征及LAMP检测方法的建立

摘要：

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是一种危害鳜鱼养殖生产的重要病原细菌,为进一步明确该病原菌的分子特征及建立快速检测技术,实验对引起翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)暴发性死亡的病原嗜水气单胞菌进行了致病性、菌株毒力特征研究,同时以嗜水气单胞菌气溶素基因aerA为分子靶标设计引物,利用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了病原嗜水气单胞菌的快速检测方法.结果表明,本次引起翘嘴鳜暴发性死亡的病原嗜水气单胞菌半致死浓度为1.6× 106 CFU/mL,携带aerA等14种毒力基因,此14种毒力基因可用于其致病性分析及分子检测.以气溶素基因aerA设计引物进行的环介导恒温扩增,结果显示可扩增出阶梯状条带,加入SYBR Green Ⅰ染色后呈现绿色的阳性反应,而对照组均未出现任何扩增条带且反应体系呈现橙色,表明LAMP检测方法对于嗜水气单胞菌检测具有很好的特异性;灵敏度检测的最低检测限为4.6×101 CFU/mL;10种经人工感染的淡水养殖鱼虾组织匀浆增菌液,提取DNA后进行LAMP方法检测,结果均可获得阳性扩增结果,而对照未染菌组呈阴性,表明该方法具有较好的应用性,可应用于嗜水气单胞菌引起的水生动物疾病的检测.

关键词：翘嘴鳜、嗜水气单胞菌、aerA基因、环介导等温扩增(LAMP)

所属期刊栏目：41

分类号：S941.42(水产保护学)

资助基金：江苏省水产三项工程项目Y2016-33和D2015-15;江苏省高校自然科学研究重大项目14KJA240001;江苏省重点研发计划项目BE2017311资助[Supported by the Projects of Shui Chan San Xiang of Jiangsu ProvinceY2016-33,D2015-15;the Major Natural Science Research Program of Jiangsu Higher Education Institutions14KJA240001;the Key Research and Development Program of Jiangsu Province BE2017311]

在线出版日期：2018-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1225-1231