人尿液N-糖蛋白/N-糖肽规模化富集鉴定

摘要：

蛋白质的N-糖基化是真核细胞中一种重要的翻译后修饰,N-糖基化修饰在调控细胞黏附、迁移、信号转导及细胞凋亡等方面扮演着关键角色.蛋白质糖基化修饰的异常变化与多种重要疾病的发生相关.尿液具有蛋白质组复杂程度低和非入侵性等特点,适合大量及连续多时间点采样研究.但由于个体差异和生理条件的影响,尿蛋白丰度的生理波动较大.目前缺乏对健康人群尿液N-糖蛋白的个体差异和生理波动的专门性研究,以及生理丰度范围的构建,难以将个体差异、正常生理波动和疾病导致的变化进行有效区分,对疾病标志物研究提出很大挑战.本研究以亲水相互作用色谱法(HILIC)为基础,对该富集方法中活化、清洗与洗脱过程进行优化,其中主要对HILIC填料粒径和富集缓冲体系进行优化,并考察了不同实验条件下N-糖肽富集的鉴定数量、选择性与稳定性,发现当HILIC填料粒径为5μm,在三氟乙酸富集体系下有更高的N-糖蛋白/N-糖肽鉴定水平.在此基础上,对20例健康男性志愿者和20例健康女性志愿者的尿液N-糖蛋白/N-糖肽进行了富集和定性、定量及功能分析.从40例尿液样本中共鉴定到1016个N-糖蛋白、2192条N-糖肽.采用非标定量策略对尿液N-糖肽的生理丰度波动范围进行了考察,尿液N-糖肽的丰度跨度约5个数量级.在此之后探索了健康人群尿蛋白N-糖基化水平的性别差异,筛选出性别相关的差异N-糖蛋白后进行了功能分析.统计学分析显示在尿液样本中性别可能是产生个体差异的重要因素.该工作为基于尿液糖蛋白质组学的功能与机制研究和临床生物标志物筛选提供了有力支撑.

关键词：亲水相互作用色谱法、生物质谱、糖蛋白质组、N-糖肽、富集

所属期刊栏目：39

分类号：O658(分析化学)

资助基金：国家重点研发计划2018YFC0910302

在线出版日期：2021-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：686-694