胶束电动色谱柱上酶反应测定低分子量肝素的抗凝血活性

摘要：

发展了一种基于胶束电动色谱(MEKC)结合柱上酶微反应的方法,用于测定低分子量肝素(LMWHs)的抗凝血活性.肝素与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)结合后,将ATⅢ抑制凝血因子10(FXa)活性提高了约1000倍.通过测定FXa水解生色肽底物CPS产生的对硝基苯胺(p-NP)就可以测定FXa的活性.因此,通过LMWHs抑制FXa产生的对硝基苯胺的量就可以测定抗凝血活性.该方法将毛细管柱端作为微量的酶微反应器,以呋喃妥英(nitrofuran-toin,NF)作为内标,依次将LMWHs溶液、ATⅢ溶液、FXa和CPS溶液导入毛细管柱端,反应物经过分子扩散、横向层流扩散混合和电压混合后反应.反应结束后,采用MEKC分离模式将产物对硝基苯胺与底物以及其他大分子分离,在其最大波长380 nm下测定产生对硝基苯胺的量,从而确定LMWHs的抗凝血活性.该方法具有自动化、重复性好、灵敏度高、样品消耗量少的优点,而且不受其他成分的干扰,可用于各种复杂样品(如血浆)中LMWHs抗FXa活性的监测.

关键词：胶束电动色谱、柱上酶反应、低分子量肝素、抗凝血活性

所属期刊栏目：38

分类号：O658(分析化学)

资助基金：国家自然科学基金;中国科学院战略先导B

在线出版日期：2020-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1243-1248