凝胶过滤/离子交换全二维液相色谱系统的构建与评价

摘要：

基于蛋白质的尺寸及带电性质,将凝胶过滤色谱(GFC)与离子交换色谱(IEC)两种分离模式结合,采用双捕集柱接口构建了GFC/2×IEC二维液相色谱(2-D LC)分离系统,同时考虑离子交换色谱分离蛋白质对等电点范围的限制,进一步结合中心切割平行柱的方法实现对蛋白质的全二维分离.为与后续蛋白质在线酶解、多肽分离及质谱鉴定匹配,系统中采用常规柱以保证蛋白质质谱鉴定对样品量的要求,3种常规分离柱分别选用凝胶过滤色谱柱TSK-GEL G3000SWXL(300 mm×7.8 mm, 5 μm)、强阴离子交换色谱柱Hypersil SAX(100 mm×4.6 mm, 10 μm)和强阳离子交换色谱柱Hypersil SCX(100 mm×4.6 mm, 10 μm).最终以酵母细胞蛋白质提取液为样品,对构建的二维系统加以评价,在总蛋白质浓度13.5 mg/mL、上样体积100 μL的条件下,将第一维分离等时间切割17次,并将切割馏分全部导入第二维继续分离,二维系统在148 min内获得的总峰容量达到884.说明所构建的系统可以用于蛋白质的在线全二维分离.

关键词：全二维液相色谱、凝胶过滤色谱、离子交换色谱、强阴离子交换、强阳离子交换、蛋白质、酵母

所属期刊栏目：35

分类号：O658(分析化学)

资助基金：国家重大科学仪器设备开发专项2012YQ12004406.National Major Instrument and Equipment Special Project 2012YQ12004406

在线出版日期：2017-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：526-532