基于Fe3O4/乙二胺四乙酸磁性粒子的集成化蛋白质组学方法

摘要：

建立了基于Fe3O4/乙二胺四乙酸(EDTA)磁性粒子的集成化蛋白质组学研究方法.首先用共沉淀法合成EDTA负载的Fe3O4/EDTA磁性粒子.在优化的溶液条件下(95％乙腈-1％三氟乙酸,体积分数),100 μg Fe3O4/EDTA磁性粒子可吸附12.4μg牛血清白蛋白(BSA),吸附容量是商品化磁珠的10倍左右.以BSA作为标准蛋白质,对所合成的Fe3O4/EDTA磁性粒子作为蛋白质组学反应器的酶解时间进行了优化,发现Fe3O4/EDTA磁性粒子处理BSA酶解1、8和16h的肽段序列覆盖率和特征肽段结果相当.因此,可以将复杂的蛋白质样品前处理时间缩短至2h内.最后,将所合成的Fe3O4/EDTA磁性粒子应用于血清的蛋白质组学研究,成功地鉴定出218种蛋白质,其中包含了41种美国食品药品管理局(FDA)认证的生物标志物.所发展的基于Fe3O4/EDTA磁性粒子的蛋白质组学样品前处理方法将蛋白质样品预富集、还原、烷基化、酶解、多肽除盐和洗脱等步骤集成到一起,减少了样品转移和处理所造成的损失.这种技术具有快速、灵敏和易于操作的特点,可用于临床蛋白质组学研究.

关键词：Fe3O4/乙二胺四乙酸(Fe3O4/EDTA)、磁性粒子、蛋白质组学、样品前处理

所属期刊栏目：34

分类号：O658(分析化学)

资助基金：国家自然科学基金项目21575057;深圳市科技计划项目JCYJ20150901153557178,JSGG20160301103415523.National Natural Science Foundation of China21575057;Shenzhen Innovation of Science and Technology Commission.JCYJ20150901153557178,JSGG20160301103415523

在线出版日期：2017-02-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1263-1269