天冬酰胺合成酶B抑制剂高效液相色谱筛选方法的建立与应用

摘要：

建立了一种快速、高效测定天冬酰胺合成酶B(AS-B)酶活性的反相高效液相色谱法(RP-HPLC).酶反应体系中的氨基酸经 2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生,通过RP-HPLC测定酶反应体系前后底物及产物的变化来分析酶的活性.采用的色谱柱为Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以50 mmol/L 醋酸钠缓冲液(pH 6.2)-乙腈(体积比为15∶85)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃,检测波长365 nm,于 6 min 内实现了各组分的基线分离.通过该方法测定反应动力学参数进行AS-B的抑制定量分析.将已知AS-B抑制剂L-谷氨酸-γ-甲酯作用于酶反应体系,测得的抑制剂的抑制常数与文献值相接近,证明该方法可用于AS-B抑制剂的筛选.

关键词：高效液相色谱法、天冬酰胺合成酶B、抑制剂、筛选

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分类号：O658(分析化学)

资助基金：国家自然科学基金项目30440046;南开大学元素有机化学国家重点实验室十六期、十七期开放基金

在线出版日期：2009-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：472-475