疏水型色谱饼对人血清蛋白质组学样品的快速分离与制备

摘要：

建立了疏水型色谱饼(10 mm×20 mm i.d.)与反相色谱(RPLC)离线二维色谱快速分离制备人血清蛋白质组学样品,并用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行检测的方法.以4种标准蛋白质的稀溶液为模型进行分离富集,得到细胞色素c(Cyt-c)与肌红蛋白(Myo)的检出限均为1 pmol/μL,溶菌酶(Lys)和胰岛素(Ins)的检出限为0.1 pmol/μL.将此方法用于人血清蛋白质组学样品的分离与制备,随着血清处理量的增大,质谱可检出的组分数目与信号强度均增加,当血清处理量达到 1.0 mL 时,可检出低丰度蛋白质或多肽285个(相对分子质量均在15 000以下).研究中将1 μg Cyt-c加入到0.5 mL血清中,用上述方法在分离富集低丰度Cyt-c上取得了很好的效果.结果表明,采用疏水型色谱饼与反相色谱联用技术不仅可对血清样品中低丰度蛋白质进行有效的分离和富集,而且一次样品的处理量大,可显著提高低丰度蛋白质的分析、检测水平.

关键词：二维液相色谱、基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱、色谱饼、蛋白质组学、人血清

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分类号：O658(分析化学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA02Z227;陕西省重点实验室基金02JS10;05JS62

在线出版日期：2008-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：331-334