10.3321/j.issn:1000-8713.2008.01.016
以睾酮为探针采用高效液相色谱法测定细胞色素CYP450 3A4的酶活性
建立了一种快速、高效的以睾酮作为探针药物评价细胞色素P450 3A4(CYP3A4)酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法.采用的色谱柱为Phenomenex C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),梯度洗脱,流速1.0 mL/min,紫外检测波长245 nm,柱温30 ℃.睾酮与大鼠肝微粒体温孵后,过已活化好的C18固相萃取小柱,收集甲醇洗脱液,于37 ℃水浴中通N2吹干,用50%甲醇复溶后进样分析测定.研究结果表明,6β-羟基睾酮的保留时间为11.60 min,线性范围为0.5~32 μg/mL,最低检出质量浓度为0.02 μg/mL,提取率为88.41%~92.73%,方法的回收率为99.07%~101.30%;睾酮的保留时间为19.27 min,线性范围为0.5~40 μg/mL,最低检出质量浓度为0.01 μg/mL,提取率为89.59%~92.66%,方法的回收率为96.50%~98.03%.两者的日内、日间相对标准偏差均小于10%,温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定.该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外睾酮及其代谢物6β-羟基睾酮的测定,可应用于体外CYP3A4酶活性的评价及酶动力学的研究.
高效液相色谱法、睾酮、6β-羟基睾酮、细胞色素P450 3A4、肝微粒体
26
O658(分析化学)
国家高技术研究发展计划863计划2002AA2Z3421
2008-04-29(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共4页
80-83