p100基因RNA干扰质粒载体的构建与鉴定

摘要：

目的:构建p100基因RNA干扰质粒载体,并检测其对多巴胺能的MN9D细胞系中p100蛋白表达的抑制作用.方法:设计并合成2条针对小鼠p100基因的RNA干扰片段,退火后分别连入pSilencerTM 3.1-H1质粒并分别命名为Sip100#1、Sip100#2,酶切和测序鉴定正确后,将以上重组质粒及阴性对照质粒分别转染MN9D细胞,运用Western Blot方法检测各组细胞胞浆内p100蛋白的表达水平.结果:(1)酶切和测序结果证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pSilencerTM3.1-H1质粒;(2)与对照组相比,转染MN9D细胞48 h后Sip100#1组及Sip100#2组p100蛋白的表达水平受到明显抑制,其中Sip100#1组下降58％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:本研究成功构建出小鼠p100基因靶向RNAi质粒载体,并能有效抑制MN9D细胞内p100蛋白的表达,为进一步研究p100蛋白所在信号通路对多巴胺能神经细胞的作用提供了工具.

关键词：RNA干扰、p100、MN9D细胞系

所属期刊栏目：30

资助基金：国家自然科学基金30870797

在线出版日期：2014-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：403-407