脑源性神经营养因子转基因成纤维细胞的构建与检测

摘要：

目的:构建大鼠脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因修饰的成纤维细胞(fibroblasts FBs).方法:真核表达载体pcDNA3/BDNF由昆明医学院神经科学研究所提供.FBs取自胎鼠.pcDNA3/BDNF重组质粒载体以阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导转染FB,并统计转染率.应用BDNF抗体进行免疫细胞化学和Western Blot检测以鉴定BDNF在细胞内的表达.并在体外培养条件下,应用经转染FBs和未转染FBs的培养液上清培养肾上腺嗜铬细胞瘤(pc12)细胞,验证 BDNF的生物活性.结果:胎鼠成纤维细胞体外培养生长状况良好.FBs转染率为(52.14±3.31)%.免疫细胞化学和Western Blot结果表明BDNF在FBs中过表达,转染组与未转染组相比BDNF阳性细胞更多,染色更深,BDNF表达量明显增多,且具有促进PC12细胞生长的活性.结论:上述结果表明,大鼠源性BDNF基因修饰的FBs构建成功.

关键词：脑源性神经生长因子、成纤维细胞、转染

所属期刊栏目：27

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2011-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：110-114