人大麻素受体启动子真核报告质粒的构建及活性分析

摘要：

目的:利用双荧光素酶报告基因体系,根据大麻素受体1(cannabinoid receptor 1,cnr1)启动子序列不同部位的转录活性来初步确定其活性区域,为脊髓缺血耐受保护中cnr1高表达的转录调控的研究奠定基础.方法:从NCBI中获取cnr1基因转录起始点5'端向上约1800 bp的核苷酸序列,按照300 bp的距离间隔,设计6个不同长度的截短体PCR引物,以人全血基因组DNA为模板,分别扩增cnr1启动子区域的截短体片段,并克隆入荧光素酶报告基因pGL3-Basic质粒中.将含有不同截短体的重组质粒分别转染Hela、Jurket和A549细胞后行荧光素酶活性检测.根据不同截短体转录活性检测结果,确定cnr1启动子活性区域.结果:成功将cnr1启动子区6个不同长度(1800、1500、1200、900、600和300 bp)的截短体克隆入荧光素酶报告基因pGL3-Basic质粒.在3种细胞系Hela、Jurket和A549的荧光素酶活性检测均显示600 bp的截短体转录活性最强.结论:成功构建了cnr1启动子的报告基因重组质粒,初步证实-600 bp到-200 bp区为cnr1的启动子的活性区域,从而为进一步研究cnr1的转录调控奠定了基础.

关键词：缺血耐受、大麻素受体1、启动子活性区域、双荧光素酶报告基因、人

所属期刊栏目：27

分类号：R3(基础医学)

资助基金：宁夏自然科学基金NZ09129

在线出版日期：2011-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：50-54