人14-3-3γ基因的腺病毒载体的构建及其在PC12细胞中的表达

摘要：

目的:构建携带人14-3-3 γ基因的重组腺病毒表达载体并确定其对PC12细胞的感染效率.方法:采用PCR方法,从Top10/pHis-14-3-3 γ质粒中扩增14-3-3 γ DNA序列,将14-3-3 γ基因定向克隆到穿梭质粒载体pAdTrack-CMV,经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1载体同源重组后得到携带人14-3-3γ基因的重组腺病毒(pAd/14-3-3 γ),采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定,转染HEK293细胞进行包装和扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化,半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度.体外感染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western Blot检测14-3-3γ蛋白的表达.结果:克隆得到人14-3-3γ基因,经PCR鉴定和测序证实结果正确,成功构建得到高滴度的重组腺病毒,并能高效感染PC12细胞.结论:本实验成功构建了表达14-3-3 γ的复制缺陷型重组腺病毒Ad-14-3-3,为用14-3-3 γ基因治疗帕金森病奠定了基础.

关键词：14-3-3γ、腺病毒载体、基因治疗、PC12细胞、人

所属期刊栏目：27

分类号：R3(基础医学)

资助基金：海南省自然科学基金808230;海南省卫生厅立项项目;海南医学院苗圃基金

在线出版日期：2011-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：44-49