犬S100β蛋白的体外克隆表达及抗体制备

摘要：

目的:制备犬S100β蛋白抗血清,为组织工程和神经损伤及修复研究提供实验基础.方法:提取犬坐骨神经总RNA,采用RT-PCR方法扩增S100β基因,并克隆入pGEM-T载体.经测序验证后,将S100β基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,IPTG诱导GST-S100β融合蛋白在大肠杆菌B121(DE3)中表达.GST-S100β融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫新西兰大白兔,获得抗血清,经酶联免疫吸附试验(ELISA)法、Western Blot和免疫组化法检测抗体的效价和特异性.结果:测序结果表明,扩增的犬S100β基因序列与GenBank中的序列一致;并得到了较高纯度的GST-S100β融合蛋白和兔源性抗S100β血清,经Western Blot、免疫组织化学及ELISA实验证实所得抗体具有较高的特异性及效价.结论:构建了犬S100β基因的重组原核表达质粒,并获得了高效表达.成功制备了兔抗犬S100β抗血清,并具有较高的效价和特异性,为进一步研究神经损伤与修复机制提供实验基础.

关键词：犬S100β、融合蛋白、抗血清

所属期刊栏目：26

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家863重大项目2006AA02A128;国家自然科学基金30670667

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：583-586