10.16305/j.1007-1334.2023.2210064
左金丸逆转KRAS突变型大肠癌西妥昔单抗耐药的作用机制研究
目的 探讨左金丸(ZJW)对KRAS突变型大肠癌西妥昔单抗(CET)耐药的逆转作用及其机制.方法 ①常规培养KRAS突变人结肠癌细胞HCT116,通过细胞增殖率(CCK-8法检测)确定ZJW无毒剂量(即10 mg·L-1),观察ZJW、CET的协同效应(ZJW 10 mg·L-1与CET 100、200 mg·L-1具有协同效应,本研究选择CET 100 mg·L-1进行后续实验).将处于对数生长期的HCT116细胞分为对照组、CET 100 mg·L-1组(CET组)、ZJW 10 mg·L-1组(ZJW组)、CET 100 mg·L-1+ZJW 10 mg·L-1组(ZJW+CET组),作用48 h;采用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡情况,Western blot法检测细胞中核因子-κB p65(NF-κB p56)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达情况,免疫荧光法检测细胞中NF-κB p65、磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达情况,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测细胞中NF-κB p65、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达情况.②将HCT116细胞皮下注射于裸鼠腋下,建立大肠癌皮下移植瘤模型,然后将16只裸鼠随机分为对照组(PBS灌胃)、CET组(CET尾静脉注射,15 mg·kg-1)、ZJW+CET组(CET尾静脉注射,15 mg·kg-1;ZJW灌胃,2055 mg·kg-1)、ZJW组(ZJW灌胃,2055 mg·kg-1),每组4只,连续干预28 d,绘制肿瘤生长图,28 d后剥离肿瘤组织,RT-qPCR法检测皮下移植瘤组织NF-κB p65、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达情况.结果 ①ZJW在HCT116细胞中的IC10为10.71 mg·L-1;CET抑制HCT116增殖的IC50为578.6 mg·L-1,与10 mg·L-1左金丸联合使用时IC50值降低为231.3 mg·L-1;CET 100、200 mg·L-1与ZJW 5、10 mg·L-1联合使用时,药物联合指数(CI)<1.②与对照组相比,ZJW组、ZJW+CET组细胞S期比例、早期凋亡率升高(P<0.05);与CET组相比,ZJW组细胞S期比例、早期凋亡率升高(P<0.05);与ZJW组相比,ZJW+CET组S期细胞比例、早期凋亡率升高(P<0.05).③与对照组比较,CET组、ZJW组细胞中Bcl-2表达降低(P<0.05),ZJW组细胞中Caspase-3表达升高(P<0.05),ZJW+CET组细胞Bcl-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65表达降低(P<0.05);与CET组相比,ZJW+CET组细胞中Bcl-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65表达降低(P<0.05),Caspase-3表达升高(P<0.05);与ZJW组相比,ZJW+CET组细胞Bcl-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65表达降低(P<0.05),Caspase-3表达升高(P<0.05).④与对照组相比,ZJW组、ZJW+CET组细胞Bcl-2、NF-κB p65 mRNA表达降低(P<0.05);与CET组相比,ZJW组、ZJW+CET组细胞Bcl-2、NF-κB p65 mRNA表达降低(P<0.05);与ZJW组相比,ZJW+CET组细胞Bcl-2、NF-κB p65 mRNA表达降低(P<0.05).⑤相较于对照组、CET组,ZJW组、ZJW+CET组裸鼠瘤体生长较为缓慢.给药28 d后剥离瘤体,与对照组相比,ZJW组、ZJW+CET组裸鼠皮下移植瘤体积缩小(P<0.05);与CET组相比,ZJW、ZJW+CET组裸鼠皮下移植瘤体积缩小(P<0.05);与ZJW组比较,ZJW+CET组裸鼠皮下移植瘤体积缩小(P<0.05).⑥与对照组相比,ZJW组、ZJW+CET组瘤体组织中NF-κB p65、Bcl-2 mRNA表达降低,Caspase-3 mRNA表达升高(P<0.05);与CET组相比,ZJW组瘤体组织中Caspase-3 mRNA表达升高(P<0.05);与ZJW组相比,ZJW+CET组瘤体组织中Caspase-3 mRNA表达升高(P<0.05).结论 ZJW可通过抑制细胞增殖、阻滞细胞周期、促进细胞凋亡等途径逆转KRAS突变大肠癌细胞对CET的耐药,继而抑制大肠癌生长,其机制可能与调控NF-κB/Bcl-2/Caspase-3通路相关.
大肠癌、左金丸、靶向治疗、耐药、中药研究、作用机制
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R735.2;R285.5;R979.1
国家自然科学基金;浙江省自然科学基金项目;浙江省宁波市卫生局宁波市医学重点学科建设项目;中国博士后基金面上项目
2023-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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