10.16305/j.1007-1334.2023.2209029
化滞柔肝颗粒减轻非酒精性脂肪性肝炎相关肝纤维化的机制研究
目的 结合网络药理学研究方法,探讨化滞柔肝颗粒(HZRG)减轻非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关肝纤维化的作用机制.方法 借助网络药理学分析聚焦HZRG治疗NASH的潜在靶点.将雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和HZRG低、高剂量组,每组8只.除对照组外,其余各组小鼠给予蛋氨酸胆碱缺乏饮食诱导NASH相关纤维化模型,造模的同时给予相应药物干预,连续4周.HE染色观察肝组织病理变化,并行非酒精性脂肪性肝病活动度评分(NAS);天狼猩红和Masson染色法观察肝脏胶原沉积情况;免疫组化法观察肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白α1链(Col1a1)的表达情况,并用ImageJ软件分析阳性表达面积.试剂盒检测肝组织总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)水平.采用生化分析仪检测各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)水平,ELISA试剂盒检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.Western blot法和免疫荧光法检测α-SMA、Col1a1、p53蛋白表达水平;RT-qPCR法检测p53 mRNA相对表达量.不同浓度转化生长因子-β1(TGF-β1)或Tenovin-6处理人源性肝星状细胞系LX2细胞24 h,检测相关指标.结果 ①网络药理学研究结果提示,p53是HZRG发挥效应的潜在靶点.②HE染色、Masson染色和天狼猩红染色结果显示,模型组小鼠肝脏脂质累积、炎细胞浸润、纤维化形成,与对照组比较,模型组小鼠肝组织病理α-SMA、Col1a1阳性表达面积增加(P<0.05),NAS评分升高(P<0.05);HZRG低、高剂量组小鼠肝细胞内脂滴减少,肝脏脂肪变和炎细胞浸润程度明显减轻,与模型组比较,HZRG低、高剂量组肝组织病理α-SMA、Col1a1阳性表达面积减少(P<0.05),NAS评分降低(P<0.05).③与对照组比较,模型组小鼠血清ALT、AST、LDH、ALP水平升高(P<0.05);与模型组比较,HZRG低、高剂量组小鼠血清ALT、AST、LDH、TNF-α水平降低(P<0.05),HZRG低剂量组小鼠血清ALP水平降低(P<0.05).④与对照组比较,模型组小鼠肝组织TG、α-SMA蛋白水平升高(P<0.05);与模型组比较,HZRG高剂量组小鼠肝组织α-SMA蛋白水平降低(P<0.05),HZRG低、高剂量组小鼠肝组织TG、Col1a1蛋白水平降低(P<0.05).⑤各组小鼠肝组织p53 mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).⑥p53蛋白在NASH小鼠肝组织及活化的LX2细胞中表达降低,HZRG及Tenovin-6可上调其表达;p53蛋白表达升高,可缓解NASH小鼠肝组织纤维化进展、抑制LX2细胞活化.结论 HZRG减轻NASH相关肝纤维化的机制可能与上调p53蛋白表达有关.
非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、化滞柔肝颗粒、中医药疗法、网络药理学、作用机制
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R575;R781;R285.5
国家自然科学基金82274448
2023-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共10页
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