巨核酸酶I-SceI转基因元件的构建及其在斑马鱼中转基因效率的评估

摘要：

巨核酸酶I-SceI是由酿酒酵母线粒体中核糖体大亚基上的Ⅰ型内含子编码的一种核酸内切酶,近年已被应用于转基因研究中.I-SceI介导的转基因大多是将I-SceI蛋白和带有其识别位点的质粒共注射于动物的受精卵,但注射酶蛋白前期处理耗时长且工作量大,直接用I-SceI的mRNA代替蛋白进行注射更为简捷.本研究应用I-SceI mRNA介导荧光蛋白基因在斑马鱼中的转植,进一步了解其转基因效率.首先设计合成带有巨核酸酶I-SceI编码序列的辅助质粒(pCS2-I-SceI),并分别构建了带有巨核酸酶I-SceI识别位点、EF1α启动子和荧光蛋白基因(eGFP/RFP)编码序列的供体质粒pI-SceI-EF1α-eGFP/RFP.辅助质粒pCS2-I-SceI体外转录成mRNA,以50 ng/μL供体质粒和100 ng/μL的I-SceI巨核酸酶mRNA共注射到斑马鱼(Danio rerio)受精卵中,注射后48 h的斑马鱼eGFP的平均荧光表达率可达75.86％.在斑马鱼的头部、躯干到尾部均可观察到荧光蛋白的表达,且随着胚胎发育,荧光信号逐渐增强.结果表明I-SceI系统在斑马鱼中可介导较高效率的转植,具有在经济鱼类转基因研究中应用的潜力.

关键词：巨核酸酶、I-SceI、斑马鱼、转基因

所属期刊栏目：24

分类号：S917(水产基础科学)

资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）;国家自然科学基金

在线出版日期：2015-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：650-655