鲢三、四核苷酸重复微卫星标记的筛选及其特征分析

摘要：

通过磁珠富集法筛选鲢(Hypophthalmichtys molitrix)的三、四核苷酸重复微卫星分子标记.提取鲢血液大片段基因组DNA,用限制性内切酶Sau3AI进行酶切,蔗糖密度梯度离心收集400～900bp长度的片段,构建鲢全基因组PCR文库,用生物素标记的微卫星探针(TGA)8、(CAG)8以及(AGAT)6进行筛选,磁珠富集含有微卫星序列的DNA片段,获得含有微卫星的单链序列;将这些序列通过PCR扩增,连接pMD 18-T载体,转入感受态大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,获得微卫星文库;再用γ-32P标记的放射性同位素探针进行二次杂交筛选,获得1 758个阳性克隆,选择测序348个克隆序列中,共含有280个微卫星座位,其中完美型167个(59.64%),非完美型28个(10%),混合型85个(30.36%).Primer 3.0软件设计60对引物,并用珠江水系的野生鲢群体对引物进行多态性位点检测.统计软件分析显示其中22对具有较高的筛选效率和多态性,可作为鲢种质评价等遗传分析的工具.

关键词：鲢、微卫星、三核苷酸和四核苷酸重复序列

所属期刊栏目：20

分类号：S917(水产基础科学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）2004CB117405

在线出版日期：2011-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：328-335