尼罗罗非鱼肝cDNA文库的构建

摘要：

用Stratagene技术构建了吉富品系尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus, GIFT strain)肝cDNA文库.首先用TRIZOL法提取肝总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度检测,表明总RNA纯度高且完整性良好.然后分离纯化mRNA,合成双链cDNA之后,加EcoRⅠ接头、EcoRⅠ末端磷酸化、XhoⅠ消化,并用葡聚糖凝胶柱层析分级收集cDNA样品,得到300 mg cDNA,符合建库要求.双链cDNA与Uni-ZAP XR Vector连接后,用GigapackⅢGold Packaging Extract进行体外包装得到cDNA文库.测得的文库滴度为1.25×107 pfu/mL,文库噬菌体的滴度符合文库保存和筛选实验的要求.随机挑选20个阳性单克隆噬菌斑进行PCR鉴定后,得出文库的重组率达100%,扩增出的片段主要集中在0.5～2 kb之间,平均插入片段长度约为1.05 kb,结果说明本实验所构建的cDNA文库质量较高.取扩增文库80 μL进行体外切割,约含3.6×106个重组子,切割后phagemid量为2.0×106,切割效率为79.4%.经抽提质粒获得质粒DNA约1.2 mg.

关键词：尼罗罗非鱼、肝、cDNA文库

所属期刊栏目：14

分类号：S917(水产基础科学)

资助基金：科技部专项基金2001BA505B0513

在线出版日期：2006-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：353-358