特利波契巴尔通体基因敲除体系的建立

摘要：

本研究旨在建立基于同源重组技术的特利波契巴尔通体基因敲除方法.研究通过扩增并融合Ⅳ型分泌系统VirB4基因的上下游同源片段,将同源片段与pJM05质粒进行体外拼接,并将pJM05-△VirB4质粒转化进入S17-1大肠杆菌中;通过双亲接合转移将大肠杆菌S17-1中的pJM05-△VirB4质粒转移到特利波契巴尔通体中进行同源臂交换,产生单交换菌株;随后利用质粒中sacB基因表达产物分解蔗糖对自身产生毒性作用,在蔗糖平板中筛选出22个双交换菌株,通过菌落PCR及测序验证,共确定出6个VirB4基因框内缺失菌株;并且测序结果表明这6个菌株在VirB4基因框内缺失了2 136 bp.

关键词：特利波契巴尔通体、VirB4基因、pJM05质粒、sacB蔗糖筛选

所属期刊栏目：37

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：闵行区产学研基金2016MH237,17Z128010007;四川省省院省校重大项目2017JZ0010;苏州科技局创新计划17Z1170010018

在线出版日期：2019-04-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：61-66