戊型肝炎病毒ORF3蛋白的原核表达和纯化

摘要：

戊型肝炎病毒(HEV)是一种无包膜、单股正链RNA病毒,其基因组长约7.2 kb,包含3个开放阅读框(ORF).ORF3位于ORF1和ORF2之间,编码含有123个氨基酸的磷酸化蛋白.本文通过PCR扩增HEV ORF3基因,将扩增产物双酶切后,插入具有相同多克隆位点的pET28a(+)、pGEX-4T-1和pET-43.1a(+)载体中,构建pET28a-ORF3、pGEX-4T-1-ORF3和pET43a-ORF3原核表达载体.将重组质粒转入E.coli DH5α,菌液PCR筛选阳性结果.序列测定正确后,将其转化E.coli BL21(DE3),加入IPTG诱导表达.SDS-PAGE分析目的蛋白表达后,进一步利用亲和层析法纯化目的蛋白.结果表明,成功构建了原核表达载体pET28a-ORF3、pGEX-4T-1-ORF3和pET43a-ORF3,所构建的载体均可在宿主菌E.coli BL21 (DE3)中表达ORF3蛋白.通过Ni-TNA和GSH-Sepharose层析纯化分别分析3种融合蛋白,发现pET43a-ORF3最适合获得纯化蛋白的ORF3蛋白,这为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了基础.

关键词：戊型肝炎病毒、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：31

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金面上项目31070132;农业部公益性行业农业科研专项200903056

在线出版日期：2013-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：76-82