山羊β防御素124定位及过表达附睾头上皮细胞系的建立

摘要：

为研究山羊β防御素124(BD124)的生物学功能,进行附睾头上皮细胞BD124的定位研究,并建立BD124过表达附睾头上皮细胞系,应用细胞免疫荧光法对山羊附睾头上皮细胞BD124进行定位;将山羊BD124基因编码区序列连接到LV5穿梭质粒后,测序验证LV5-BD124质粒构建情况,然后将其与包装质粒共转染293T细胞进行包装生产并重组LV5-BD124慢病毒,并采用有限稀释法测定病毒滴度;之后采用实时荧光定量PCR和Western blot检测确认LV5-BD124慢病毒侵染96、120 h后山羊附睾头上皮细胞中BD124 mRNA和蛋白的过表达情况;最后用嘌呤霉素进行2次筛选后获得BD124过表达稳转附睾头上皮细胞系.定位结果显示,BD124阳性绿色荧光信号在细胞核周围高度聚集,且在细胞质和细胞核内也有分布.测序结果显示,BD124序列插入LV5慢病毒载体后,表达的LV5-BD124慢病毒载体滴度为3.0×108 TU/mL.荧光定量PCR和Western blot结果显示,LV5-BD124附睾头上皮BD124 mRNA和蛋白表达量显著高于对照组;LV5-BD124侵染后的附睾头上皮细胞经2次嘌呤霉素筛选后,阳性细胞比例增加,传2代后细胞内荧光信号保持稳定.

关键词：山羊、附睾头上皮细胞、β防御素124、稳转系

所属期刊栏目：50

分类号：S827(家畜)

资助基金：国家自然科学基金;山西省省筹资金资助回国留学人员科研项目

在线出版日期：2022-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1476-1481