GPCR-G蛋白融合传感器检测GPCR与G蛋白相互作用的灵敏度

摘要：

目的 以GPR56-G蛋白融合传感器为例,建立一种检测GPCR与G蛋白相互作用的高灵敏方法.方法 将带有NanoLuc荧光素酶(Nluc)的G蛋白α亚基的N端融合到GPCR的C端,构建GPCR和G蛋白 α亚基两者的融合蛋白为实验组,受体和G蛋白共表达作为对照组.在受体表达水平相同的条件下,利用生物发光共振能量转移(BRET)方法检测GPR56-Gα12亚基融合蛋白、GPR56和Gα12亚基共表达的组成性活力.利用BRET方法检测GPR56激动剂(P19)对GPR56-Gα12亚基融合蛋白相互作用的影响.结果 BRET比率结果显示,与对照组GPR56和Gα12亚基共表达相比,GPR56-Gα12亚基融合蛋白具有更强的组成性活力(F=424.7,P<0.001);与对照组比较,P19激活实验组的半数有效浓度(EC50)下降,差异有统计学意义(t=13.36,P<0.001),GPR56-Gα12亚基融合蛋白对激动剂(P19)的感知更灵敏,亲和力更强.结论 GPCR-Gα 亚基融合蛋白系统是一种检测GPCR与G蛋白相互作用更灵敏的方法.

关键词：GPCR-Gα 亚基融合蛋白、GPR56、Gα12、组成性活力、P19

所属期刊栏目：60

分类号：Q5-33

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;山东省自然科学基金

在线出版日期：2022-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：85-90