肠道病毒71型微复制子的构建

摘要：

目的 构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系,研究微复制子的复制及表达情况.方法 聚合酶链式反应扩增绿色荧光蛋白(EGFP),利用特定酶切位点及连接酶,将目的基因片段连接至pMD19-T载体,分别构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系.荧光显微镜下观察微复制子表达情况,实时荧光定量PCR观察微复制子复制情况.结果 EV71非结构蛋白微复制子及EV71 3C蛋白酶微复制子表达后,均可观察到特异性绿色荧光,荧光强度有明显差异;转染后12 ～72 h取样所测RNA含量几乎不变.结论 非结构蛋白全长及3C蛋白酶启动微复制子转录强度不同,所构建微复制子不具备复制功能,提示结构蛋白编码区对病毒RNA复制有重要意义.

关键词：肠道病毒71型、微复制子、报告基因、非结构蛋白

所属期刊栏目：53

分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;山东省医药卫生科技发展计划

在线出版日期：2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：35-40