弓形虫棒状体蛋白7真核表达载体的构建及其免疫保护作用

摘要：

目的：构建弓形虫棒状体蛋白7（ROP7）基因的真核重组表达载体，观察其对小鼠的免疫保护作用。方法根据 GenBank 发表的弓形虫 ROP7序列设计合成一对引物，通过 PCR 扩增 ROP7基因，将其插入真核表达载体pEGFP-C1中构建重组质粒 pEGFP-C1／ROP7（pROP7）。用重组质粒转染 HEK293T 细胞并验证其在细胞内的表达。将36只雌性 BALB ／c 小鼠随机分为3组：磷酸缓冲盐溶液（PBS）对照组、pEGFP-C1对照组和 pROP7实验组。然后用 PBS、pEGFP-C1和 pROP7分别免疫相应组别的小鼠。采用 ELISA 检测小鼠血清特异 IgG 水平，观察弓形虫感染小鼠后的存活时间并评价其免疫保护力。结果PCR 扩增出1728 bp 的目的基因片段，真核表达载体构建成功，且能在 HEK293T 细胞中表达。目的基因的相应蛋白可被羊抗弓形虫多克隆抗体识别。重组质粒免疫的小鼠产生了较高水平的血清抗体。虫体攻击试验中，pROP7实验组小鼠的生存时间较对照组小鼠延长（P ＜0．05）。结论本研究构建的真核表达质粒在对抗弓形虫感染时具有一定的免疫保护作用，为弓形虫基因疫苗的研制提供了参考。

关键词：刚地弓形虫、ROP7 基因、核酸疫苗、免疫保护

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金81071373

在线出版日期：2015-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：11-15