慢病毒介导RNAi沉默大鼠脊髓神经元NF-κB p65基因的观察

摘要：

目的 构建核转录因子κB(NF-κB) p65基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并转染体外培养的大鼠脊髓神经元,观察其沉默效率.方法 针对大鼠NF-κB p65基因特异性序列,设计3条NF-κB p65-siRNA序列及1条阴性对照序列,合成包含各正反义靶序列的互补DNA链,退火形成双链DNA,插入到经BamH I和EcoR I酶切后的pFU-GW慢病毒载体中,PCR筛选阳性克隆,DNA测序鉴定.与慢病毒包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0通过lipofectamine 2000共转染至包装细胞293T,经滴度测定后转染体外培养的大鼠脊髓神经元.实验分为5组:阴性对照组、LV-NC组、LV-shNF-κB p65-1组、LV-shNF-κB p65-2组和LV-shNF-κB p65-3组,观察转染效率,Western blotting法检测慢病毒表达载体对神经元NF-κB p65基因的沉默效应.结果 测序结果证实合成的寡核苷酸链插入正确,重组载体构建成功,测定病毒滴度为108-9 TU/mL,慢病毒重组体能够成功转染大鼠脊髓神经元,转染效率大于90％,与阴性对照组或LV-NC组比较,LV-shNF-κB p65-1组和LV-shNF-κB p65-2组NF-κB p65蛋白的表达明显下调(P均＜0.01),而LV-shNF-κB p65-3组无明显下调(P＞0.05).结论 成功构建了大鼠神经元NF-κB p65基因的RNAi慢病毒载体,它可使大鼠脊髓神经元NF-κB p65基因表达下调.

关键词：RNA干扰、核转录因子κB p65、慢病毒、神经元、大鼠

所属期刊栏目：52

分类号：R745(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金;山东省自然科学基金

在线出版日期：2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：23-26,32