人参皂苷Rb1对NEP基因启动子活性的影响

摘要：

目的 构建NEP启动子缺失体-荧光素酶报告基因质粒,探查神经内肽酶(NEP)基因启动子中与人参皂苷Rb1影响NEP启动子活性有关的位点.方法 用NEP基因5’上游启动区2.4kb片段和荧光素酶报告基因载体pGL3-basic构建NEP启动子-荧光素酶报告基因质粒pGL3-nep2.4;用Erase-a-Base System对pGL3-nep2.4质粒2.4 kb DNA插入片段5’端进行缺失,构建NEP启动子缺失体-荧光素酶报告基因质粒;用Rb1处理NEP启动子缺失体转染的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,检测双荧光素酶活性,观察Rb1对NEP启动子活性的影响.结果 成功构建了含NEP启动子DNA序列的重组质粒pGL3-nep2.4.荧光素酶活性检测显示,转染pGL3-nep2.4质粒的SH-SY5Y细胞荧光素酶活性是转染pGL3-basic的13.1倍(P＜0.01).Rb1处理可使转染pGL3-nep2.4质粒的SH-SY5Y细胞荧光素酶活性增加,其是对照组的2.9倍(P＜0.01);细胞荧光素酶活性检测亦显示,NEP基因上游启动区-894～-857 bp(Region I)及-100 ～-82 bp(RegionⅣ)片段缺失后,启动子活性分别是缺失前的29％(P＜0.01)和25％ (P ＜0.01),-559 ～-534 bp(RegionⅡ)及-223 ～-179 bp(RegionⅢ)片段缺失后,启动子活性分别是缺失前的5.12倍(P＜0.01)及1.81倍(P＜0.01).Rb1处理后,Region Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ缺失体质粒转染细胞荧光素酶活性均与对照组无统计学差异(P＞0.05),RegionⅣ缺失质粒pGL3-226转染细胞荧光素酶活性也与对照组无明显差异(P＞0.05),而含RegionⅣ质粒pGL3-244转染细胞荧光素酶活性则是对照组的1.61倍(P＜0.01).结论 NEP基因5’上游2.4 kb DNA片段有较强的启动子活性,Rb1能明显增加其活性.NEP基因2.4kbDNA片段有2个正调控区(Region Ⅰ和RegionⅣ)和2个负调控区(RegionⅡ和RegionⅢ),Rb1通过RegionⅣ发挥正调控作用.

关键词：人参皂苷Rb1、神经内肽酶、启动子

所属期刊栏目：51

分类号：R741.02(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金;山东省中青年科学家科研奖励基金

在线出版日期：2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：42-48,53