骨肉瘤细胞中SORBS1的表达和定位

摘要：

目的 构建人SORBS1真核表达载体并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位.方法 以GST-hSORBS1为模板,利用PCR扩增hSORBS1基因cDNA全长,并将其克隆至3*Flag标签的真核表达载体中.进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取蛋白进行Western blot检测.同时利用共聚焦激光显微镜观察3* Flag-hSORBS1在MG-63细胞中的定位,使用免疫沉淀的方法纯化hSORBS1蛋白.结果 hSORBS1基因cDNA全长成功构建到真核表达载体3*Flag中,Western blot检测到3*Flag-hSORBS1融合蛋白表达,且在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞周边,并成功纯化hSORBS1蛋白.结论 成功构建3*Flag-hSORBS1真核表达质粒,同时鉴定其融合蛋白的表达,并纯化hSORBS1蛋白.3*Flag-hSORBS1蛋白主要定位在细胞周边.

关键词：hSORBS1、骨肉瘤、真核表达载体、融合蛋白、免疫沉淀

所属期刊栏目：50

分类号：Q291

资助基金：国家自然科学基金资助项目30800415和81070688

在线出版日期：2012-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：21-24,29