miR Let-7a1/f1下调前列腺癌1LNCaP细胞中AMD1蛋白的表达

摘要：

目的 研究let-7a1/f1在前列腺癌LNCaP细胞中对S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AMD1)表达的影响及作用机制.方法 以LNCaP细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增let-7a1/f1基因的前体序列,将其克隆到pSilencerTM4.1-CMV neo载体中,构建成let-7a1/f1真核表达载体pSilencer-let7a1/f1.瞬时转染LNCaP细胞后,通过RT-PCR法,检测let-7a1/f1在转录水平的表达,同时通过RT-PCR及Western blot检测AMD1在转录和翻译水平的表达变化.构建AMD1基因3'非翻译区(3'-UTR)荧光素酶报告基因融合质粒(pMIR-AMD1),并与pSilencer-let7a1/f1共转染LNCaP细胞,通过双荧光素酶活性检测,确定let-7a1/f1对AMD1 3'-UTR的作用.结果 pSilencer-let7a1/f1和pMIR-AMD1经酶切电泳及测序鉴定正确,pSilencer-let7 a1/f1转染LNCaP细胞后,let-7a1/f1表达明显上升,AMD1在转录水平无变化,在翻译水平明显下降,let-7a1/f1转染后,pMIR-AMD1的荧光素酶活性明显降低.结论 miR Let-7a1/f1可作用于AMD1 3'-UTR靶点,抑制AMD1蛋白的翻译,从而降低LNCap细胞中AMD1蛋白的水平.

关键词：miR Let-7a1/f1、前列腺肿瘤、腺苷甲硫氨酸脱羧酶

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分类号：R737.25(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81071720;81172045;山东省优秀中青年科学家科研奖励基金计划资助项目BS2009SW042;山东省科技发展计划资助项目2009GG20002045

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：29-33,38