NT4-TAT-6×His-VHLβ结构域肾癌抑制融合肽cDNA克隆的构建
目的 构建VHL蛋白(von Hippel-Lindau protein,pVHL)β结构域肾癌抑制融合肽cDNA,并将其应用于肾癌的微基因治疗.方法 分别设计合成pVHLβ结构域104-123短肽cDNA的正向和反向引物以及编码TAT-6×His cDNA的正、反向引物,使用互为引物模板PCR方法,扩增获得具有Nae Ⅰ/Eco 72I酶识别位点的TAT-6×His cDNA片段和具有Eco 72I/Bam H I酶识别位点的VHLβ抑制肽cDNA片段,将两个片段分别克隆到pGEM-T easy中,使用双脱氧终止法测序,通过DNASIS软件分析同数据库资料一致性和编码的氨基酸序列.用Nae I和BamH I双酶切获取的TAT-6×His-VHLβcDNA片段插入到具有NT4信号肽的pBV220载体中,构建了pBV220-NT4-TAT-6×His-VHLβ质粒.结果 经DNA测序证实,获得了编码TAT-6×His cDNA片段和编码VHLβ抑制肽的cDNA片段,分析证实核酸序列和推导的氨基酸同数据库资料一致.重组质粒pBV220-NT4-TAT-6×His-VHLβ酶切图谱证实已将NT4-TAT-6×His-VHLβ融合肽cDNA克隆到pBV220原核表达载体中.结论 成功扩增了编码TAT膜渗透肽和6×His标签肽以及VHL抑癌基因β结构域肾癌抑制肽的cDNA片段,构建了具有NT4信号肽的TAT-6×His-VHLβ融合肽cDNA.
VHLβ结构域肾癌抑制肽、融合肽、微基因、肾肿瘤
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R737.11(肿瘤学)
山东省自然科学基金Y2006004
2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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