人S-腺苷蛋氨酸脱羧酶α亚基的克隆、表达与纯化

摘要：

目的:构建人S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(SAMDC)的α亚基的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化表达的重组蛋白.方法:从大肠癌细胞中提取总RNA,RT-PCR方法扩增人SAMDCα亚基的cDNA片段801 bp,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx-4-SAMDC-α.将重组表达质粒转化入E.coli JM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白,并通过6×His·Tag,利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白.结果:酶切鉴定和DNA测序显示,人SAMDC α亚基的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx-4且方向正确,SDS-PAGE电泳显示表达出32kD的外源蛋白.Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6×His·Tag的融合蛋白,且Ni-NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白.结论:成功构建、表达且纯化了重组SAMDC-α亚基,为制备抗SAMDC抗体、研究SAMDC基因与结直肠肿瘤的关系提供了必要的工具.

关键词：S-腺苷蛋氨酸脱羧酶、结直肠肿瘤、原核表达

所属期刊栏目：44

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：山东省科技厅资助项目032050111

在线出版日期：2006-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1184-1188