pEGFP-Kallikrein重组真核表达载体的构建及其在兔内皮祖细胞中的表达

摘要：

目的:构建携带人组织激肽释放酶(tHK)基因,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体,并导入兔内皮祖细胞(EPCs)中表达,验证tHK基因修饰EPCs用于血管病治疗的可行性.方法:PCR扩增tHK目的基因,将该全长基因定向克隆至真核表达载体pEGFP-N3上,构建重组质粒载体.并利用脂质体转染体外培养的EPCs,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察tHK-EGFP融合蛋白在细胞中的表达;用RT-PCR方法验证tHK在mRNA水平的表达;用ELISA方法验证tHK蛋白水平的表达.结果:酶切和测序证实pEGFP-Kallikrein重组质粒构建正确,重组质粒载体在EPCs中获得了表达,表达的融合蛋白具有tHK和EGFP的双重活性.结论:通过基因克隆方法成功构建了pEGFP-Kallikrein重组质粒载体,并且在EPCs中稳定表达,为进一步研究tHK基因修饰EPCs双重治疗血管病的技术策略奠定了基础.

关键词：激肽释放酶类、内皮、干细胞、基因转移技术

所属期刊栏目：44

分类号：R3(基础医学)

资助基金：山东省教育厅资助项目9915

在线出版日期：2006-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：576-579