人IL-26的基因克隆及其真核表达载体的构建

摘要：

目的:克隆人白细胞介素-26(human interleukin-26,hIL-26)基因,构建其真核表达载体并探讨在真核细胞中的表达.方法:提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hIL-26基因;目的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌E.coli-DH5α,菌落PCR、酶切分析和DNA序列分析鉴定重组克隆.用SalⅠ和EcoR Ⅰ将目的片段切下,插入pIRES2-EGFP的相应位点,构建表达载体pIRES2-EGFP/hIL-26并进行酶切鉴定.将重组质粒用非脂质体试剂Fugene 6转染至COS7细胞中.结果:重组克隆载体pMD18-T/hIL-26内插入片段序列与GenBank上报道的hIL-26基因序列完全一致;pIRES2-EGFP/hIL-26经酶切鉴定与预期结果一致;荧光显微镜观察可见转染后的细胞有荧光出现,Western blotting鉴定证明hIL-26基因得到了有效表达.结论:成功构建了hIL-26基因的真核表达载体并在真核细胞中获得了有效表达.

关键词：白细胞介素26、基因克隆、COS7细胞、真核表达载体

所属期刊栏目：44

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划30371304

在线出版日期：2006-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：541-544