发卡样CTGF特异性RNA干扰重组体的构建及筛选

摘要：

目的:利用Pgenesil-1质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA表达的质粒,并筛选有效的抑制序列.方法:分别设计3对有小发夹结构的两条DNA序列及1对非特异对照序列,经退火成互补双链,再克隆至带有U6启动子的质粒载体Pgenesil-1中,构建重组体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析.将构建成功的4组重组体转染HSC-T6 24h后,通过半定量RT-PCR分析HSC-T6 CTGFmRNA的表达水平,与空白对照及仅加转染试剂组比较分析.结果:CTGF的shR-NA片段被成功克隆到Pgenesil-1质粒载体中,经酶切与测序证实构建成功,转染HSC-T6 24h后,与空白对照组相比,通过半定量RT-PCR分析发现有两组细胞CTGFmRNA水平明显下降,24 h抑制效率分别为(74±5)%,(P＜0.01);(61±3)%,(P＜0.05).转染非特异shRNA组及仅加转染试剂组CTGFmRNA表达水平无明显变化.结论:成功构建了能表达CTGFshRNA的3组重组体,并筛选出能高效抑制CTGF表达的shRNA序列,为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了实验基础.

关键词：结缔组织生长因子、RNA干扰、短发夹RNA、质粒、肝纤维化、基因表达

所属期刊栏目：44

分类号：R575.2(消化系及腹部疾病)

资助基金：山东省卫生厅资助项目2005年第25号

在线出版日期：2006-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：351-356