特异性寡核苷酸探针反向杂交在mtDNA点突变检测中的应用研究

摘要：

目的:建立一种快捷、有效的mtDNA点突变检测体系.方法:线粒体病患者15例,根据临床表现分为3组,线粒体脑肌病伴高乳酸血症、卒中样发作(MELAS)组7例,单纯型线粒体肌病组4例,慢性进行性眼外肌麻痹(CPEO)组4例.用苯酚/氯仿法提取外周全血DNA,采用PCR/ASO反向杂交技术,用PCR扩增mtDNA的突变"热区"-tRNALeu(UUR)基因,在下游引物的5'端标记上地高辛,与点在尼龙膜上的5对寡核苷酸(ASO)探针:A3243/A3243G(野生型/突变型)、T3271/T3271C、G3460/G3460A、T3291/T3291C、C3256/C3256T进行反向杂交,根据杂交显色信号,确定有无突变.同时利用PCR/RFLP方法加以验证.结果:MELAS组中有A3243G点突变3例,但没有其他4个位点的突变.单纯型线粒体肌病组和CPEO组均未发现以上5个位点的突变.PCR/ASO反向杂交法与PCR/RFLP法结果一致.结论:PCR/ASO反向杂交技术,适用于已知mtDNA点突变的检测,具有敏感、节时、节省费用的特点,尤其适用于大批量标本的筛选.

关键词：线粒体疾病、寡核苷酸探针、点突变、反向杂交

所属期刊栏目：44

分类号：R746.9(神经病学与精神病学)

资助基金：教育部科学技术研究项目Y2002C34

在线出版日期：2006-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：150-153,160