靶向于端粒酶调控区反义RNA腺病毒的构建

摘要：

目的:构建靶向于人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)调控区的反义RNA腺病毒.方法:PCR扩增hTERT调控区1 779 bp的DNA片段,与腺病毒穿梭载体pShuttleCMV连接,PCR筛选反向插入的hTERT反义腺病毒穿梭载体pCMV-ashTERT,将pCMV-ashTERT与骨架质粒pAdEasy-1共转染受体菌BJ5 183,进行同源重组.用含卡那霉素的LB平板筛选同源重组阳性的克隆,酶切鉴定后,以Pac Ⅰ酶切线性化,转染包装细胞HEK293,在显微镜下观察细胞形态以鉴定重组的腺病毒,并以空斑形成实验测定重组病毒的滴度.结果:成功构建了端粒酶催化亚单位调控区的反义RNA重组腺病毒(pAd咀shTERT),滴度为2.8×1011pfu/ml.结论:成功构建hTERT调控区反义腺病毒,为探讨以端粒酶为靶点的抗肿瘤药物奠定了基础.

关键词：人类端粒酶催化亚单位、腺病毒载体、RNA、反义、同源重组

所属期刊栏目：43

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2005-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：667-670