结核分支杆菌Ag85B融合蛋白表达载体的构建及纯化

摘要：

目的:构建结核分支杆菌Ag85B基因在大肠杆菌的融合表达载体,制备MBP/Ag85B融合蛋白并将其纯化.方法:常规方法构建重组表达质粒pMAL-p2-Ag85B,内切酶EcoR Ⅰ/HindⅢ酶切鉴定;重组表达质粒pMAL-p2-Ag85B转化大肠杆菌,经0.3 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D thiogalactoside,IPTG)诱导表达产生融合蛋白(MBP/Ag85B),Western blot鉴定表达产物.pMAL纯化树脂(Amylose resin)对MBP/Ag85B融合蛋白纯化.结果:重组质粒pMAL-p2-Ag85B经EcoRⅠ/HindⅢ酶切后,1%琼脂糖凝胶电泳证实Ag85B正向插入pMAL-p2载体,重组菌经IPTG诱导后,有约70 kD蛋白表达,与预期的融合蛋白分子量相符,蛋白表达量约占细菌总蛋白量的40%;Western blot显示,MBP/Ag85B融合蛋白与人抗结核IgG抗体呈特异性反应;经Amylose resin纯化后,MBP/Ag85B融合蛋白的纯度可达95%以上.结论:成功构建结核分支杆菌Ag85B重组融合蛋白表达质粒并制备及纯化其融合蛋白,为进一步研究Ag85B生物学功能及其抗原表位分析奠定了物质基础.

关键词：分支杆菌、结核、基因、Ag85B、重组融合蛋白质类

所属期刊栏目：43

分类号：R524(结核病)

资助基金：山东省自然科学基金Y98CO5034

在线出版日期：2005-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：570-573