小鼠胚芽干细胞的分离与培养

摘要：

目的:探讨胚芽干细胞的提取、培养和体外扩增的最佳条件;筛选胚芽干细胞在体外培养中的活力最佳时期.方法:分离受精11d小鼠生殖腺嵴,经消化制备成胚芽干细胞悬液,将细胞分别接种于基础培养液、同种胎鼠成纤维细胞条件培养液、添加LIF的基础培养液、有饲养层的培养基和与胎鼠成纤维细胞共培养5种不同的培养体系中,比较观察在5种培养体系中胚芽干细胞的形态学、碱性磷酸酶染色和体外分化情况.结果:①在含15%胎牛血清的DMEM/F12基础培养液中培养时,胚芽干细胞贴壁明显减少,EGC克隆形成很少,传代率很低;②在基础培养液中添加白血病抑制因子(LIF)或同种胎鼠成纤维细胞条件培养液时,细胞生长情况与基础培养液培养相比无明显差异;③有饲养层存在时,4～6 d后出现鸟巢状胚芽干细胞集落.传4代后集落逐渐减少、变小.6～7代后集落消失;④与胎鼠成纤维细胞共培养时,2～4 d即可见EGC集落形成.传6代后细胞的集落逐渐减少、变小;⑤在与胎鼠成纤维细胞共培养时,第2、3代细胞的生长曲线基本相同,接种24 h后细胞呈对数生长.培养液的更新可以显著影响小鼠胚芽干细胞的生长.第5代的细胞增殖速度减慢.结论:与饲养层细胞或腹壁组织成纤维细胞共培养可较好地培养和扩增胚芽干细胞:第3代细胞的活力最好.

关键词：胚芽干细胞、体外培养、小鼠

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分类号：Q952.1(动物学)

资助基金：山东省科技厅资助项目01BB1DADA1

在线出版日期：2005-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：561-566