重组人可溶性DR5 蛋白的表达、制备及其生物活性检测

摘要：

目的:纯化毕赤酵母GS115菌株表达的重组人可溶性死亡受体5(DR5)蛋白,并研究其对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)所诱导细胞凋亡的阻断效应.方法:大量扩增可溶性DR5酵母表达载体转化阳性的毕赤酵母GS115菌株,收集上清,利用ProBondTM亲和层析柱纯化获得重组可溶性DR5蛋白,用SDS-PAGE、Western Blot检验纯化产物的特异性和纯度.用MTT法检测纯化的可溶性DR5蛋白对TRAIL诱导人宫颈癌细胞系Hela细胞凋亡作用的阻断效应.结果:转化阳性的毕赤酵母GS115菌株可成功表达分子量为26 kD的可溶性DR5蛋白,经ProBondTM亲和层析柱纯化,SDS-PAGE、Western Blot鉴定,结果显示获得了高纯度的重组人可溶性DR5蛋白,蛋白产量达20μg/ml;体外活性检测结果显示,纯化的可溶性DR5蛋白可部分阻断TRAIL诱导的Hela细胞的凋亡,阻断率最高达53.6%.结论:经纯化后的重组人可溶性DR5蛋白可有效阻断TRAIL诱导的细胞凋亡反应.

关键词：重组蛋白类、HeLa细胞、受体、DR5、细胞凋亡

所属期刊栏目：42

分类号：R730.51(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金N0 30128023

在线出版日期：2004-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：252-256