人ODC基因第三外显子反义RNA腺病毒载体的构建

摘要：

目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因第三外显子反义RNA的腺病毒载体.方法:RT-PCR方法克隆出人ODC基因第三外显子的片段,插入pMD18-T载体中,经Sal Ⅰ、Bgl Ⅱ酶切,插入穿梭质粒pAd-Track-CMV形成重组质粒pAdTrack-CMV-ODCr.经Pme Ⅰ酶切线性化后,转入pAdesy-1细菌中与含腺病毒基因骨架的质粒pAdesy-1同源重组.将重组质粒pAdesy-ODCr经Pac Ⅰ酶切后,转染293细胞包装成腺病毒颗粒,经荧光显微镜和PCR方法对重组腺病毒进行鉴定.结果:用RT-PCR方法从人前列腺癌组织中扩增出120 bp的cDNA片段,经测序证实为ODC基因第三外显子的片段.重组质粒pAdTrack-CMV-ODCr转入pAdesy-1细菌中获得多个阳性克隆.重组质粒pAdesy-ODCr转染293细胞进行包装,经荧光显微镜观察可见其在293细胞中表达.进一步通过PCR法证实其含有目的基因.结论:成功地构建了ODC基因第三外显子反义RNA重组腺病毒载体,为研究其抗肿瘤的作用奠定了基础.

关键词：鸟氨酸脱羧酶、腺病毒载体、RNA、反义

所属期刊栏目：41

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：山东省科技厅资助项目;山东省卫生厅资助项目2001CA1CAA3

在线出版日期：2003-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：371-374