HPV16L1-E7重组腺病毒rAd5HPV16L1-E7的构建及克隆表达

摘要：

目的:研制人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1-E7重组腺病毒,以期获得防治宫颈癌的重组腺病毒减毒活疫苗和嵌合病毒样颗粒疫苗.方法:以HPV16型野毒株HPV16-114/K为模板,利用PCR克隆技术构建可表达HPV16主要衣壳蛋白L1(1-301aa)和转化蛋白E7(1-60aa)融合基因的重组质粒pUC19L1-E7,HPV16L1-E7DNA片段经质粒pBSLl-E7转入腺病毒Ad5穿梭质粒pCA14L1-E7,与腺病毒质粒pBHGl0共转染293细胞,制备重组腺病毒rAd5HPV16L1-E7,密度梯度超迷离心纯化HPV16嵌合L1-E7VLP.结果:成功构建了HPV16L1-E7重组质粒pUC19L1-E7,制备HPV16L1-E7重组腺病毒rAd5HPV16L1-E7,HPV16L1-E7融合蛋白可在293细胞中高效表达,可达细胞总蛋白的10%以上,并装配成嵌合病毒样颗粒(cVLP).结论:成功制备了可高效表达IPV16L1-E7嵌合L1-E7VLP的重组腺病毒rAd5HPV16L1-E7载体疫苗,为HPV重组腺病毒疫苗用于宫颈癌的防治打下了基础.构建的pUC19L1载体可以比较方便的插入外源基因,用来构建多价疫苗,因此在制备HPV16多价疫苗方面具有广泛的应用价值.

关键词：乳头瘤病毒、人、重组腺病毒、克隆、分子、疫苗、减毒

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分类号：R373.1;R511.B;Q785;R457.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：中国科学院资助项目39670038;教育部科学技术研究项目

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：113-116,119