腺相关病毒AAV2/Anc80L65对原代培养的螺旋神经元形态标记效能的探究

摘要：

目的 探究含有神经元特异性启动子(human synapsin promoter,hSyn)及绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent pro-tein,eGFP)标记的AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP病毒对体外培养的螺旋神经元(spiral ganglion neuron,SGN)形态的标记效果.方法 向体外培养的SGNs中加入一定量的AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP病毒,通过荧光显微镜在低倍镜下计数荧光神经元的比例以评估其对螺旋神经元细胞的转染的特异性和效率,在高倍镜下观察荧光神经元胞体及神经突的精细形态.并通过膜片钳实验验证该病毒在活体SGNs中的实际应用.结果 AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP病毒对体外培养的SGNs具有很高的特异性和转染率,且不会产生明显的细胞毒性.同时,该病毒可以快速清晰地标记螺旋神经元胞体和神经突的形态且对神经元形态没有明显损伤.相比Tuj1 荧光染色还可以标记更加精细的神经突结构,如丝状伪足.当应用于膜片钳实验中时,AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP病毒有助于神经元识别和定位,可极大提高 SGNs 膜片钳实验的效率和成功率.结论 AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP适合作为标记体外培养的活体SGNs形态的理想工具.

关键词：AAV2/Anc80L65-hSyn-eGFP病毒、螺旋神经元形态、原代培养、标记效果

所属期刊栏目：37

分类号：R764.43+1(耳鼻咽喉科学)

资助基金：国家自然科学基金82071040

在线出版日期：2023-06-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1-6,20