锁核酸和不对称扩增辅助的等位基因多重引物识别KRAS基因突变的研究

摘要：

RAS突变的检测为指导结直肠癌的预测和预后提供了有力的工具.探讨一种简洁、低成本的用于检测KRAS基因突变的多重引物等位基因识别方法(multiplex primer allelic discrimination,MP m AD).利用不对称扩增和含锁定核酸(locked nucleic acid,LNA)的等位基因特异性引物、以及共同的反向引物和探针,进行多重孔检测和参考孔检测,以多重检测和参考检测的扩增循环数值差(ΔCq)来判定结果.同时使用福尔马林固定石蜡包埋组织(Formalin Fixed and Paraffin Embedded Tissues,FFPET)样本或在野生型基因组DNA背景下混合质粒进行非临床性能评价,并采用Kappa检验比较MP m AD与Sanger测序的结果一致性.该方法对KRAS热点突变检测灵敏度至少为3％;凝胶电泳也验证了方法的特异性;重现性的变异系数(coefficient of variation,CV)<15％;同源基因检测未观察到交叉反应.通过分析115例FFPET标本,MPmAD法与Sanger测序结果之间无统计学差异(k>0.9;p<0.001).MP m AD方法可以简洁、低成本地检测KRAS热点突变.

关键词：多重引物等位基因识别、结直肠癌、锁核酸、RAS

所属期刊栏目：36

分类号：Q754(分子遗传学)

资助基金：校国际合作重点项目QLUTGJHZ2018008

在线出版日期：2022-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：55-61