Caco-2细胞单层模型的建立和评估

摘要：

目的 建立Caco-2细胞单层的培养和模型评价的方法,为后续研究普萘洛尔(propranolo)对映异构体转运动力学特征奠定基础.方法 常规培养条件下,将Caco-2细胞分别以2.5×105、5.5×105 cells/ml分别接种于Transwell的聚碳酸脂膜上(0.4ml/well),在培养10d、15d和21d后,以细胞单层跨膜电阻(Transepithelial electrical resistance,TEER)、标志物的表观通透系数(The apparent permeability coefficients,Papp)初步评价 Caco-2细胞单层模型的完整性,以扫描电镜和透射电镜验证模型的完整性,以期确定建模时的细胞接种密度和培养时间;检测细胞单层模型在HBSS液和不同浓度的普萘洛尔溶液中培养不同时间时的TEER值,以评价单层模型的稳定性.结果 以5.5×105 cells/ml 接种21d后,TEER＞200Ω*cm2、Papp＜1.0×10-6cm/s,形态学观察可见细胞融合形成连续、完整的单细胞层,细胞表面覆盖一层刷状缘微绒毛;细胞单层模型在HBSS液和盐酸普萘洛尔药液(≤640mmol/L)中孵育8h后TEER＞200Ω*cm2.结论 以5.5×105 cells/ml为细胞接种密度且培养至21d后,Caco-2细胞单层形态与小肠上皮细胞类似,跨膜电阻、标志物透过量均达到要求,具有良好的完整性,而且细胞单层的完整性在HBSS液和盐酸普萘洛尔药液(≤640mmol/L)中可稳定8h,表明该细胞模型建立成功,可用于后续普萘洛尔对映异构体药物吸收动力学研究.

关键词：人结肠癌细胞、转运、跨膜电阻、渗透性

所属期刊栏目：34

分类号：R813.1+1(放射医学)

资助基金：云南省应用基础研究联合专项项目2011FB216

在线出版日期：2013-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：7-10