复制型HBV重组腺病毒的制备

摘要：

目的 通过细茼体内同源重组方法,构建含1.3拷贝HBV DNA片段(HBV4.1)的HBV复制型重组腺病毒.方法 从质粒pTh-HBV4.1上获取HBV4.1片段,插入腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建含HBV4.1的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/HBV4.1.然后在大肠杆菌BJ5183内与pAdEasy-1进行同源重组,形成重组腺病毒质粒pAd-GFP/HBV4.1,经脂质体2000转染HEK293细胞进行包装和扩增,获得腺病毒Ad-CFP/HBV4.1.通过荧光显微镜下观察GFP绿色荧光蛋白的表达,检测腺病毒滴度和感染效率;采用PCR法检测腺病毒DNA上有无HBV基因组存在.结果 经酶切鉴定确认含HBV穿梭质粒pAdTrack-CMV/HBV4.1和重组腺病毒基因组质粒pad-GFP/HBV4.1构建成功;GFP荧光检测提示重组腺病毒Ad-GFP/HBV4.1已成功包装;PCR扩增表明重组腺病毒内携带有HBV DNA片段.在HEK293细胞中获得的病毒滴度可达(4.2～4.8)×107 efu/ml;当MOI为100时,感染HEK293细胞的效率>90%.结论 成功构建了携带1.3拷贝HBV基因组的重组腺病毒Ad-GFP/HBV4.1,为进一步建立高水平HBV复制型细胞和动物模型以用于HBV生物学特性的研究英定了基础.

关键词：AdEasy系统、腺病毒、乙肝病毒、同源重组、细菌

所属期刊栏目：29

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家杰出青年基金项目30325036;国家重点基础研究计划2006CB504300

在线出版日期：2008-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：500-503